【答案】D

【解析】试题分析：一般采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，A项正确；菌液经过连续划线，菌液中的菌体会越来越少，最终会获得单个细菌形成的菌落，B项正确；每次划线前后都需要将接种环灼烧灭菌，因此按照图中划线顺序（d→c→b→a），整个划线过程需要对接种环灼浇5次，C项正确；每次划线的菌种来自上一区域的末端，因此划线的起始区域菌落最多，由图乙可推知，图甲中的d区域菌落多，为划线的起始位置，D项错误。